Interpretación de la Información Bioquímica Fares Taie - Análisis Clínicos

HEPATITIS B (CARGA VIRAL)

Ver: Introducción a Biología Molecular

Sinonimia: determinación de HBV- DNA.

Método:

  • Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR)
  • Branched DNA (b DNA): el objetivo de este ensayo son regiones conservadas del genoma del HBV con sondas destinadas a detectar todos los genotipos conocidos del virus. Es una tecnología de amplificación de señal para la cuantificación directa de ácidos nucleicos virales tal cual circulan fisiológicamente en suero de pacientes infectados ya que no hay amplificación del material genético. Los ensayos de b-DNA utilizan estándares que son calibrados contra un gold estándar que es validado por tres métodos analíticos independientes (espectrofotometría, análisis de fosfato, hipercromicidad)


  • Especificidad :mayor del 98%.
    Sensibilidad:0.7 HBV M eq/ml (2.5 pg/ml)
    Rango dinámico: 0.7-5000 HBV Meq/ml (2.5-17.700 pg/ml)

    Muestra: VER APENDICE DE TOMA DE MUESTRA DE BIOLOGIA MOLECULAR.

    Valor de referencia: Depende el método utilizado.

    Ver: GRAFICOS DE HEPATITIS B

    Significado clínico:
    Durante la etapa aguda de la infección por el virus de la hepatitis B y el período inicial de una infección crónica, el DNA está en forma episomal (libre o extracromosomal) y replica en el hepatocito con transcripción completa del genoma, produciendo por lo tanto viriones infectivos, DNA polimerasa, HbsAg, Hbcore antígeno y HbeAg. Esta fase es de alta infectividad y de enfermedad hepática activa en las formas crónicas.
    Por diversos factores, del huésped y vírales, esta etapa puede evolucionar a la fase no replicativa de infección donde el DNA del virus se integra al genoma del hepatocito (cromosoma). Si bien es más frecuente que ocurra en una etapa crónica, también se han descripto casos de integrantes en etapa aguda y aún en hepatitis fulminantes.
    El genoma integrado puede ser defectivo, y por lo tanto la transcripción es incompleta, generalmente se expresa el gen S con poca o ninguna expresión de las demás proteínas virales. Esta fase está asociada con la aparición del anticuerpo anti-HBe en suero, baja infectividad y remisión de enfermedad activa en el hígado que puede mostrar una hepatitis crónica persistente o cirrosis inactiva.
    Siempre con HbsAg (+) esta separación en fases nunca es absoluta o definitiva, ya que pueden encontrarse pacientes con anti-HBe en suero y tener todavía HBV-DNA en circulación (viriones) y/o Hbcore antígeno intrahepático con una hepatitis crónica activa.
    Esto explicaría la reactivación observada en algunas hepatitis crónicas en fase no replicativa.
    Por lo tanto, los factores determinantes en la patogénesis de la injuria hepática por HBV la replicación viral y la respuesta inmune celular.
    En la infección latente una cierta proporción de las células mononucleares de la sangre periférica de portadores crónicos del virus, poseen formas monoméricas o multiméricas del ADN del HBV está presente en linfocitos B, monocitos, células linfoblásticas de la médula ósea así como en leucocitos polimorfonucleares.
    La eficacia de la terapia antiviral usada en el tratamiento de pacientes con HBV se hace con marcadores serológicos o con medición de enzimas de la función hepática. La forma más directa y confiable de medir la replicación viral es a través de la detección cuantitativa de la carga viral (DNA) en plasma.
    Un rápido y sostenido descenso en los niveles de HBV DNA en pacientes recibiendo terapia con Alfa interferón, muestra ser un factor predictivo de un tratamiento favorable.
    Aunque debe ser usado en combinación con otros tests, es un marcador temprano de recurrencia.

    INDICACIONES PARA LA TERAPIA CON INTERFERON HEPATITIS CRÓNICA B ASÍ COMO EL MONITOREO DE LA TERAPIA.
    INDICACIONES
    FALTA DE CONTRAINDICACIONES (CIRROSIS HEPATICA DESCOMPENSADA,ENFERMEDAD AUTOINMUNE, DEPRESION, ENFERMEDAD EXTRAHEPATICA SEVERA, EMBARAZO)
    HOSTOLOGIA HEPATICA
    RECOMENDADA
    PROTOCOLO
    INTERFERON ALFA
    4-6 MILLONES IU,3 VECES POR SEMANA
    DURACION
    4-6 MESES
    MONITOREO
    EXAMEN CLINICO:CADA 2 SEMANAS POR LAS PRIMERAS 6-8
    TRANSAMINASAS :CADA 2 SEMANAS POR LAS PRIMERAS 6-8 SEMANAS.
    HBV-DNA (HIBRIDACION) Y HBeAg Y ANTI-HBe CADA 3 MESES
    META TERAPEUTICA
    NORMALIZACION DE TRANSAMINASAS, SEROCONVERSION DEL HBeAg a ANTIHBe (EN PACIENTES HBeAg POSITIVOS),ELIMINACION DEL HBV DNA,ELIMINACION DEL HBsAg

    La determinación de carga viral se usa para medir niveles de HBV DNA en pacientes infectados crónicamente los cuales fueron tratados con bajas dosis de interferón (5 . 105 unidades en días alternados incrementando a 3.106 por 24 semanas.
    Los niveles de ALT y Hbeag antes de iniciada el tratamiento no reflejan los niveles de HBV-DNA. Ni la ALT ni Hbeag refleja los niveles extremadamente aumentados de HBV-DNA .
    En individuos Hbeag negativo que son HBV-DNA positivo y contienen una mutación en el gen pre -core es muy importante el uso de la carga viral para el monitoreo de la terapia, ya que estos pacientes con dicha mutación luego del tratamiento pueden tener una recuperación clínica pero el HBV puede permanecer muy bajo ( PCR positivo ) por periodos que exceden 5 años.

    Utilidad clínica:

    • Evaluación de transplantes hepáticos: la medición de los niveles de DNA-HBV sugiere el riesgo de reinfeccion en los transplantes hepáticos.
    • Factor pronóstico de progreso de la enfermedad y del desenlace del tratamiento .
    • Monitoreo del tratamiento con antivirales (interferón) y las tendencias de la enfermedad. Los cambios se consideran significativo solo si ellos son mayores que aquellos cambios debido a la variabilidad biológica o los debidos a la variabilidad del ensayo
      Un cambio en los niveles de HBV-DNA mayores de 2 logaritmos detectados por la técnica de b-DNA se consideran significativo.

    Falsos negativos: muestras recolectadas con heparina que inhiben la polimerasa. Mutaciones de ácidos nucleicos que afectan la región donde se unirá el “primer” causa un falso negativo


    Bibliografía:

    1. LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical laboratory results, English edition, 1998.



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