Interpretación de la Información Bioquímica Fares Taie - Análisis Clínicos

VIRUS RESPIRATORIOS

Diagnóstico Virológico

Métodos directos:

  • Aislar al virus en cultivos celulares, huevos embrionados o animales de experimentación
  • Identificación del virus aislado por técnicas de inmunomarcación u otras técnicas
  • Detección de partículas virales por microscopía electrónica
  • Detección de antígenos virales por técnicas de inmunomarcación: inmunofluorescencia, inmunoperoxidasa, ELISA.
  • Detección de ácidos nucleicos por hibridación directa, PCR, carga viral
  • Detección de enzimas virales como la transcriptasas reversa

Métodos indirectos:

  • Detección de anticuerpos
  • Conversión serológica en dos muestras pareadas de suero
  • Determinación de IGM especifica en una sola muestra en periodo agudo

MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES

INFECCIÓN/ENFERMEDADES/ VIRUS MÁS COMUNES
MUESTRA TÉCNICA DE DIAGNOSTICO
RESPIRATORIAS:
Adenovirus
Respiratorio sincicial
Parainfluenza 1-3
Influenza A y B
Sarampión
Enterovirus
Rhinovirus
Parotiditis
Citomegalovirus
Herpes simplex

Hantavirus

ANF, HN y F, LBA,
Biopsia o autopsia







Sangre, suero, orina
Sangre, suero, orina
Tejidos, sangre, suero

IF (Ag), ELISA








IF, ELISA, Cultivo rápido (shell-vial), serología, IgM e IgG
PCR, ELISA IgM e IgG
EXANTEMÁTICAS:
Maculopapular:
· Adenovirus
· Enterovirus
· Rubéola
· Sarampión
· Parvovirus B19
· HV-6y7
· Epstein Barr virus

Vesicular:
· Coxsackie A
· ECHO
· Herpes Simplex
· Varicela Zoster

ANF, H N y F, MF
ANF, HNyF, MF
Suero
Suero, ANF, sangre y orina
Suero
Suero
Suero


HF, MF
HF, MF
HV, líquido vesicular
HV, líquido vesicular

IFI(Ag) latex, ELISA
Aislamiento, PCR
IHA, ELISA(MyG),MEIA
ELISA, IFI(Ag y Ac)
ELISA, IFI(Ag y Ac)
ELISA, IFI(Ag y Ac)
ELISA, IFI(Ag y Ac)


Aislamiento, serología
Aislamiento, serología
IFI, ELISA(Ag) serología
IFI, ELISA (Ag) serología
SISTEMA NERVIOSO CENTRAL, MENINGITIS, ENCEFALITIS:
· Enterovirus
· Herpes simplex.
· Parotiditis
· Arbovirus
· Rabia
HF, MF, LCR
LCR, biopsia de cerebro
HF, LCR, orina
Sangre
Hisopado conjuntival, de mucosa yugal, saliva sangre
Aislamiento, PCR
Aislamiento, PCR, IFI (Ag)
Aislamiento, PCR, serología
Aislamiento, PCR
Aislamiento, serología, IFI
PARÁLISIS:
· Poliovirus
· Enterovirus
MF
MF
Aislamiento
Aislamiento
CONGENITAS Y PERINATALES:
· Citomegalovirus

· Herpes Simplex
· Rubéola
· Parvovirus
Orina, sangre

Hisopado vesicular, suero
Suero
Suero
IFI (Ag), AISLAMIENTO (CR), Serología,
antigenemia PP65
Aislamiento, serología, IFI (Ag)
Serología (G,M)
Serología (G,M)
GASTROINTESTINALES
· Adenovirus 40,41
· Rotavirus
· Astrovirus, Calicivirus
MF
MF
MF
ELISA,(Ag)
ELISA (Ag),látex(Ag), ME
ME
HEPÁTICAS:
Hepatitis A, B, C, D, E y otras Suero ELISA (varios marcadores) PCR, RIBA, LIA (HCV)
OCULARES
· Adenovirus
· Enterovirus (70)
· Herpes Simplex
Hisopado ocular
Hisopado ocular
Hisopado ocular
IFI (Ag), aislamiento
Aislamiento
IFI (Ag), aislamiento, ELISA
CARDÍACAS
· Coxsackie B
· Citomegalovirus
HF, MF, líquido pericárdico, suero, biopsia, sangre liquido pericárdico, orina Aislamiento, serología (G;M)
PCR
IFI, cultivo rápido
SÍNDROME MONONUCLÉOSICO
· Epstein Barr virus
· Citomegalovirus
Suero
HF, sangre, orina
Serología (VCA G Y M, EBNA, EA)
Aislamiento (CR), serología
GENITALES
· Herpes simplex
· Papiloma
· Molusco contagioso
Hisopado cervical, hisopado genital,(vesículas)
PAP, biopsia
Biopsia
IFI, aislamiento, ELISA
Hibridización, PCR, Inmunoperoxidasa
Citología, ME
URINARIO
· Adenovirus
· Citomegalovirus
Orina
Orina
Aislamiento
Aislamiento(CR), IFI (Ag)
FIEBRES HEMORRÁGICAS
· Fiebre hemorrágica argentina
· Otras fiebres hemorrágicas
Sangre
Sangre
Aislamiento, serología GyM ELISA, IFI
Aislamiento, serología GyM (ELISA, IFI)

ANF: aspirado nasofaríngeo; HNYf: hisopado nasal y faríngeo; LBA: lavado broncoalveolar; MF: materia fecal; MF: materia fecal; HV: hisopado vesicular, LCR. liquido cefalorraquídeo, IHA: inhibición de la hemoaglutinación; MEIA: Elisa modificado; IFI: Inmunofluorescencia indirecta; ME: microscopía electrónica; CR: cultivo rápido

RECOLECCIÓN, TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS

Para realizar el diagnóstico virológico es conveniente que las muestras se obtengan dentro de la primera semana de iniciados los síntomas debido a que existe mayor probabilidad de detectar o aislar el virus.
La muestra debe colocarse en medios de transportes adecuados(provistos por el laboratorio) para que los virus y/o sus estructuras se puedan conservar intactas.
Los hisopos secos no mantienen la infectividad ni la viabilidad por ello no deben utilizarse.
Las muestra deben enviarse al laboratorio rápidamente, en caso contrario se pueden mantener por 1-2 días en heladera a 4-8 grados C, no congelar a menos que transcurra más tiempo

VIRUS RESPIRATORIOS

Familia Género Tipos y grupos
Orthomyxoviridae Influenza Influenza A, B, C
Paramyxoviridae
Paramixovirus
Pneumovirus
Parainfluenza 1,2,3,4; Paperas
RSV, Sarampión
Picornaviridae
Coronaviridae

Rhinovirus
Enterovirus
Coronavirus

111 serotipos
Coxackie A (24s), B (6s) Echovirus (33s)
3 serotipos

Adenoviridae Mastadenovirus ADV 47 serotipos
Herpetoviridae Herpes virus HSV, CMV, VZV

En nuestro país la infeccion respiratoria aguda (IRA )baja es la tercera causa de mortalidad en nuestro país en menores de 1 año y la segunda en niños de 1-4 años
Los agentes virales más frecuentes son: Adenovirus, Paramixovirus, Parainfluenza, Virus Sincicial Respiratorio

Adenovirus(ADV):
Son virus formados por DNA.
Tienen afinidad por la mucosa del tracto respiratorio, gastrointestinal,conjuntival y por el tejido linfoide.
Las infecciones más comunes son: faringitis, fiebre faringoconjuntival, IRA, neumonía, infecciones oculares, cistitis e infecciones gastrointestinales
La gastroenteritis es la segunda causa mas frecuente de diarrea infantil, despues de la producida por Rotavirus.
Se asocian a infecciones latentes del tejido linfoide o renal, las que se pueden activar por inmunosupresión.
Las infecciones se presentan durante todo el año especialmente en primavera e invierno, distribuyéndose en todo el mundo. El contagio se produce por secreciones nasales y bucales.

Tabla síndromes clínicos y serotipo de adenovirus más frecuentemente involucrados:

Enfermedad Población afectada Serotipos involucrados
Faringitis aguda febril Lactantes, niños 1,2,3,5,6,7
Enfermedad aguda de vías respiratorias altas y bajas Reclutas militares, lactantes y niños 3,4,7,11,14,21
Síndrome tipo pertussis Lactantes y niños 5
Queratoconjuntivitis epidémica Todas las edades 8,19,37
Fiebre faringoconjuntival Niños 3 y 7
Diarrea Ninos 40 y 41
Conjuntivitis folicular Todas las edades 3,4 y 7

Los anticuerpos neutralizantes, inhibidores de Hemaglutinación, y fijadores de complemento (FC) aparecen 7 días despues de la aparición de los síntomas y alcanzan el titulo máximo a las 2-3 semanas
Al mismo tiempo aparecen Ig A e Ig G en las secreciones nasales.
Los anticuerpos fijadores de complemento pueden persistir hasta 6-12 meses despues de la infección. El resto de los anticuerpos permanecen elevados durante años.
En general no se producen reinfecciones por el mismo tipo de adenovirus, debido a que la infeccion deja una inmunidad tipo-específica.

Diagnóstico:
La FC es el ensayo de elección para la serología de infeccion aguda. En los niños a veces no se produce un aumento importante del titulo de anticuerpos FC. También puede realizarse por ELISA.
El diagnóstico rápido es otro método para la búsqueda de las partículas virales.

FAMILIA PARAMOXYVIRIDAE

Formada por los virus del Sarampión, Parotiditis, varios virus productores de IRA ,muy común en los niños, los virus Parainfluenza y el virus Sincicial Respiratorio (VRS). Estos últimos producen la mitad de las neumonías, crup y bronquiolitis en los niños pequeños.
En general causan patología en la población pediátrica, aunque también pueden afectar a los adultos.
Los virus Parainfluenza y VRS solo afectan el tracto respiratorio y no se diseminan a otros órganos.
La inmunidad se debe a la presencia de IgA en la mucosa respiratoria. Son comunes las reinfecciones.

Parainfluenza

Este virus tiene 4 tipos (1-4). En general no se asocian a enfermedades severas en las personas inmunocompetentes.
En los niños, en la primera infancia, producen infecciones severas y hasta fatales del tracto respiratorio.
Entre ellas: resfrios comunes, crup, bronquitis, bronquiolitis, neumonía, faringitis, bronquiolitis y bronconeumonía.-
En niños de 6 meses a 6 años los virus de Parainfluenza 1y2 son la causa más importante de crup.
Las reinfecciones son comunes en niños y adultos, porque la inmunidad es de corta duración y tipo-específica.
Este virus es cosmopolita y se encuentra en todas las estaciones, aunque con menor frecuencia en verano.
Se transmite a través de las microgotas de las secreciones.

Diagnóstico
Se realizan los métodos ya mencionados para agentes virales.
Los métodos directos de elección son: Inmunofluorescencia (IF) y Enzimoinmunoanálisis (ELISA). Estos se realizan en aspirado nasofaríngeo detectando los antígenos virales.
El diagnóstico serológico en general no se recomienda, debido a la baja respuesta inmune sobre todo en lactantes.

VIRUS SINCICIAL RESPIRATORIO (VRS)

Es uno de los agentes mas frecuentes de enfermedad respiratoria severa en los lactantes y niños pequeños, inmunosuprimidos y ancianos. Los síntomas clínicos son: bronquitis, bronquiolitis, bronconeumonía y neumonía.
En nuestro país los brotes anuales de este agente ocurren en invierno. El contagio se produce igual que en los virus anteriores por microgotas.
El VRS es la causa más frecuente de bronquiolitis en lactantes menores de 1 año en todo el mundo, puede causar neumonías. Tanto la bronquiolitis como las neumonías pueden ser graves y fatales.
La infección se produce por aerosoles a través de al mucosa respiratoria o de la conjuntiva, manos u objetos contaminados.

Diagnóstico:
La muestra de elección es el aspirado nasofaríngeo obtenido en los primeros días de la enfermedad.
Los métodos rápidos como la IF directa o indirecta tienen una sensibilidad similar al cultivo viral. También en el mercado hay otros métodos como el ELISA pero tienen menor sensibilidad que la IF.
La serología no es adecuada para lactantes debido al bajo título de anticuerpos que pueden presentar
En adultos y niños mayores por técnica de ELISA se pueden detectar IG M o Ig G, siendo su sensibilidad menor que la de los métodos que detectan antígenos.

ORTOMIXOVIRUS

Este grupo esta formado por virus influenza tipo A; B y C, su genoma contiene RNA
Son causa de gripe produciendo desde una infeccion leve del tracto respiratorio superior hasta una infeccion respiratoria aguda, anorexia y dolor de cabeza.
La neumonía puede presentares como complicación sobre todo en ancianos y niños
El período de incubación de la gripe es de pocas horas a 2 días pudiendo variar de 1-4 días. La convalecencia es larga durando hasta 1-2 semanas.
Es común la leucopenia y linfopenia en el 2-3 día, en el 5 se observa linfocitosis, neutropenia, eosinofilia y monocitosis. El día 11 se normalizan los leucocitos.
La transmisión es por la microgotas de las secreciones y los brotes ocurren generalmente en invierno.
Tanto en la infeccion natural o con la vacunación se producen IgA, IgM e IgG.

Diagnóstico
Otros virus pueden ocasionar síndromes gripales, debido a esto fuera del período de epidemia es difícil realizar un diagnóstico confiable de la infeccion sin la ayuda del laboratorio.
Se utilizan métodos directos: aislamiento en cultivo e identificación de virus o métodos rápidos que detectan el antígeno viral en secreciones respiratorias.
Los métodos indirectos se realizan en dos muestras de suero tomadas en el periodo agudo y en el de convalecencia de la enfermedad.


Bibliografía:

1. Mandell, Bennett, Dolin. Enfermedades Infecciosas: principios y práctica. Editorial Médica Panamericana. Cuarta edición. Madrid España 1997.


 


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