El SARS-CoV-2 es el pat\u00f3geno viral causante de la COVID-19, y el diagn\u00f3stico de COVID-19 se puede hacer mediante tomograf\u00eda computarizada de los pacientes sospechosos y se realiza una prueba de laboratorio confirmatoria utilizando m\u00e9todos publicados que usan reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (RT-qPCR).<\/p>
Aunque los m\u00e9todos RT-qPCR se utilizan como el est\u00e1ndar de oro para la detecci\u00f3n de pat\u00f3genos debido a su alta sensibilidad y especificidad, todav\u00eda tienen algunas falencias. Para superar cualquier restricci\u00f3n de la RT-qPCR y a\u00fan detectar \u00e1cidos nucleicos de pat\u00f3genos, se han desarrollado m\u00e9todos de amplificaci\u00f3n isot\u00e9rmica. Entre dichos m\u00e9todos, el m\u00e9todo de amplificaci\u00f3n isot\u00e9rmica mediada por bucle (LAMP) tiene algunas ventajas que se pueden aplicar para las pruebas de punto de atenci\u00f3n (POCT). El ensayo LAMP, bien optimizado, muestra una sensibilidad comparable a la de la PCR, de menos de 10 copias por reacci\u00f3n.<\/p>
Los cient\u00edficos del Instituto de Investigaci\u00f3n de Tecnolog\u00eda Qu\u00edmica de Corea (Daejeon, Rep\u00fablica de Corea) y sus colegas, desarrollaron y evaluaron ensayos de RT-LAMP para detectar el ARN gen\u00f3mico del SARS-CoV-2. El equipo utiliz\u00f3 ARN viral del SARS-CoV-2 que se prepar\u00f3 como se describi\u00f3 anteriormente. El ARN viral, hCoV-229E y hCoV-OC43, se aislaron de los medios de cultivo de c\u00e9lulas MRC-5 infectados y el ARN MERS-CoV se aisl\u00f3 del lisado de bolas de c\u00e9lulas de las c\u00e9lulas Vero infectadas. Para evaluar el n\u00famero de copias gen\u00f3micas de los ARN virales, las diluciones de los ARN est\u00e1ndar y los ARN virales en el tamp\u00f3n TE se sometieron a una RT-qPCR de un solo paso. Las reacciones de RT-qPCR se llevaron a cabo utilizando un instrumento LightCycler 96 (Roche Molecular Systems, Inc, Pleasanton, CA, EUA).<\/p>
El equipo inform\u00f3 que los ensayos de RT-LAMP utilizados en su estudio pueden detectar desde 100 copias de ARN de SARS-CoV-2. Cinco de los siete conjuntos de cebadores mostraron amplificaci\u00f3n espec\u00edfica para al menos una r\u00e9plica de duplicado con una concentraci\u00f3n de ADNc correspondiente a 1,7 x 101 copias de ARN de entrada. No se observ\u00f3 reactividad cruzada de los ensayos de RT-LAMP con otros coronavirus humanos. El m\u00e9todo de cristal violeta de Lauco (LCV) se aplic\u00f3 para lograr la detecci\u00f3n colorim\u00e9trica de la reacci\u00f3n LAMP para su ensayo RT-LAMP, de modo que las pruebas se realizaran potencialmente con un mayor rendimiento.<\/p>
Los autores concluyeron que desarrollaron ensayos de RT-LAMP altamente espec\u00edficos para la detecci\u00f3n de SARS-CoV-2. Los resultados de estos ensayos de RT-LAMP se pueden detectar dentro de los 30 minutos posteriores al comienzo de la reacci\u00f3n de amplificaci\u00f3n. Adem\u00e1s, proporcionaron condiciones de reacci\u00f3n optimizadas a las que se aplica el m\u00e9todo de detecci\u00f3n colorim\u00e9trica de LCV que se puede usar para las pruebas de punto de atenci\u00f3n. El estudio fue publicado el 7 de abril de 2020 en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.<\/p>