La enfermedad de Chagas (EC) es causada por la infecci\u00f3n con el par\u00e1sito protozoario intracelular Trypanosoma cruzi. La Organizaci\u00f3n Mundial de\u00a0 la Salud estima que aproximadamente 8 millones de personas en Latinoam\u00e9rica est\u00e1n infectadas. Sin embargo, debido a la creciente migraci\u00f3n de\u00a0 latinoamericanos a m\u00faltiples pa\u00edses en todo el mundo, esta patolog\u00eda ahora debe ser considerada una enfermedad global.<\/p>\n
En Colombia, la prevalencia de infecci\u00f3n por T. cruzi es de alrededor del 5%, correspondiente a 700,000 personas, y, en algunas \u00e1reas del departamento de Santander, la seroprevalencia es de cerca del 50%. Las manifestaciones cl\u00ednicas de la EC incluyen una fase aguda y una cr\u00f3nica, la cual se presenta con un amplio espectro de manifestaciones con formas card\u00edacas, digestivas y neurol\u00f3gicas. Sin embargo, s\u00f3lo aproximadamente entre un 20-30% de los individuos infectados desarrolla la cardiomiopat\u00eda chag\u00e1sica cr\u00f3nica y\/o el megaes\u00f3fago\/megacolon.<\/p>\n
El diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n con T. cruzi es complejo, especialmente durante la fase cr\u00f3nica, debido a la ausencia de s\u00edntomas y a la parasitemia baja o intermitente2 que hace que los m\u00e9todos parasitol\u00f3gicos directos tengan\u00a0 baja sensibilidad. Por esta raz\u00f3n, el diagn\u00f3stico se basa en m\u00e9todos serol\u00f3gicos, los cuales detectan la presencia de anticuerpos espec\u00edficos\u00a0 dirigidos contra ant\u00edgenos de T. cruzi combinados con hallazgos cl\u00ednicos y epidemiol\u00f3gicos. Sin embargo, las pruebas serol\u00f3gicas presentan alta sensibilidad, pero poca especificidad por reacciones cruzadas con otros par\u00e1sitos como Leishmania sp. y T. rangeli. En este escenario, la Organizaci\u00f3n Panamericana de Salud (OPS) sugiri\u00f3 que por lo menos dos ensayos basados en diferentes t\u00e9cnicas deber\u00edan ser usados en paralelo para aumentar la precisi\u00f3n diagn\u00f3stica porque un solo ensayo no es considerado lo suficientemente sensible y espec\u00edfico. Pero esta estrategia ha llevado a un aumento en el n\u00famero de resultados inconclusos que dificultan el manejo cl\u00ednico de estos casos. Adem\u00e1s, el diagn\u00f3stico correcto no s\u00f3lo es una prioridad para identificar a los individuos que deben recibir un tratamiento adecuado, sino, tambi\u00e9n, para reducir y prevenir el riesgo de transmisi\u00f3n a trav\u00e9s de trasfusiones de sangre y\/o trasplante de \u00f3rganos.<\/p>\n
Los m\u00e9todos inmunol\u00f3gicos se basan en el ensayo inmunoenzim\u00e1tico (ELISA), ensayo de hemaglutinaci\u00f3n indirecta (HAI), inmunofluorescencia\u00a0 indirecta (IFI), ensayo de inmunotransferencia (IB) y ensayo inmunocromatogr\u00e1fico (IC). La mayor\u00eda de los ensayos usan como ant\u00edgeno lisados\u00a0 crudos del par\u00e1sito; sin embargo, se ha descrito el uso de prote\u00ednas recombinantes y\/o p\u00e9ptidos sint\u00e9ticos para aumentar la especificidad de las\u00a0 pruebas. A pesar de que los m\u00e9todos inmunol\u00f3gicos se usan en el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi, los m\u00e9todos moleculares proporcionan una alternativa, especialmente en casos de serolog\u00eda dudosa. Estos m\u00e9todos est\u00e1n basados, principalmente, en la amplificaci\u00f3n por reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR). Sin embargo, el ensayo de PCR anidada (PCR-A)10, el ensayo de PCR cuantitativa en tiempo real\u00a0 (PCR-RTQ), y el ensayo de oligocromatograf\u00eda (OligoC) se han realizado para mejorar la detecci\u00f3n de ADN de T. cruzi. Dada la heterogeneidad\u00a0 de los resultados reportados de las pruebas disponibles para el diagn\u00f3stico, el objetivo de este estudio fue comparar la precisi\u00f3n de los m\u00e9todos\u00a0 serol\u00f3gicos y moleculares para detectar la infecci\u00f3n por T cruzi en pacientes con enfermedad de Chagas cr\u00f3nica.<\/p>\n
El estudio es anal\u00edtico con dise\u00f1o de casos y controles, que incluy\u00f3 un total de 205 personas. En el estudio, los individuos fueron seleccionados de\u00a0 una base de datos de aproximadamente 2,000 pacientes que hab\u00edan sido reclutados para un estudio de epidemiolog\u00eda molecular de la EC, realizado\u00a0 por nuestro grupo de investigaci\u00f3n durante los \u00faltimos 10 a\u00f1os. La base de datos cuenta con datos epidemiol\u00f3gicos, cl\u00ednicos, de laboratorio y la informaci\u00f3n de cada participante. La recolecci\u00f3n de los datos epidemiol\u00f3gicos se llev\u00f3 a cabo cara a cara por entrevistadores entrenados con independencia del personal m\u00e9dico que elabor\u00f3 el cuestionario. El diagn\u00f3stico cl\u00ednico fue establecido por consenso por un panel independiente formado por dos m\u00e9dicos cardi\u00f3logos. Con el fin de conocer el valor diagn\u00f3stico de cada prueba serol\u00f3gica y molecular para la detecci\u00f3n de T. cruzi y porque no existe una prueba est\u00e1ndar de oro para el diagn\u00f3stico de la EC, la selecci\u00f3n de los individuos se realiz\u00f3 mediante la combinaci\u00f3n de caracter\u00edsticas epidemiol\u00f3gicas y cl\u00ednicas. Por lo tanto, los criterios de inclusi\u00f3n para el grupo de los pacientes con miocardiopat\u00eda chag\u00e1sica (n= 100) fueron personas de zonas rurales en las que el nivel de endemicidad es elevado, con cardiomiopat\u00eda claramente compatible con EC por electrocardiograma, ecocardiograma y Holter de 24 h; mientras que las personas sin signos y s\u00edntomas card\u00edacos y provenientes de una zona urbana no end\u00e9mica conformaron el grupo control (n= 105).<\/p>\n
Adem\u00e1s, todas las personas vivieron en estas \u00e1reas por 10 o m\u00e1s a\u00f1os. La recolecci\u00f3n de las muestras fue as\u00ed: a cada persona se le tomaron tres\u00a0 muestras de sangre; una de \u00e9stas (6 mL) se utiliz\u00f3 para obtener suero y las otras dos (4 mL cada una y con anticoagulante EDTA) para aislar el\u00a0 ADN gen\u00f3mico a partir de la capa leucocitaria. El tiempo y temperatura de almacenamiento entre la recolecci\u00f3n de la sangre y la extracci\u00f3n de ADN que de 48 h a 4\u00b0 C. Las muestras de suero y de ADN se almacenaron por congelaci\u00f3n a -70 y -20\u00b0 C, respectivamente, hasta la realizaci\u00f3n del ensayo. Estas muestras se utilizaron para evaluar el rendimiento diagn\u00f3stico de los m\u00e9todos serol\u00f3gicos y moleculares para detectar la infecci\u00f3n por T. cruzi. Las pruebas de laboratorio fueron realizadas por dos profesionales expertos en Microbiolog\u00eda, quienes no conoc\u00edan la informaci\u00f3n de los individuos. Dos investigadores, que tampoco conoc\u00edan la informaci\u00f3n de los individuos, revisaron los resultados de las pruebas de laboratorio. Los miembros del panel revisaron individualmente cada prueba de laboratorio antes de reunirse para acordar un resultado final.<\/p>\n
Todas las pruebas de laboratorio fueron asignadas correctamente, con 100% de concordancia entre los miembros del panel.<\/p>\n
Los anticuerpos anti-T. cruzi en suero fueron determinados mediante Elisa casero y recombinante, HAI y las pruebas de IC.<\/p>\n
El ELISA casero se realiz\u00f3 en placas de microtitulaci\u00f3n de 96 pocillos (Dynatech sistema micro ELISA; Alemania) con extracto soluble de epimastigotes de una cepa aut\u00f3ctona de T. cruzi I (MHOM\/CO\/06\/338).<\/p>\n
Las placas se recubrieron con 100 \u03bcL de 2.0 \u03bcg mL-1 de ant\u00edgeno diluido en tamp\u00f3n de carbonato – bicarbonato, pH 9.6, por pocillo y se incubaron durante la noche a 4\u00b0C. Despu\u00e9s las placas se lavaron con Tween 20 (0.05 %) en soluci\u00f3n salina tamponada con fosfato (137 mM de NaCl, 2.68 mM de KCl, 1.47 mM de Na2HPO4, y 9.03 mM de KH2PO4\u20222H2O), pH 7.4 (PBS-T20). Las placas se loquearon con 2 % de leche descremada en PBS-T20. Cada muestra fue probada en duplicado con 100 \u03bcL de suero diluido 1:800 en PBS-T20. Las placas se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente y se lavaron de nuevo. Posteriormente, se a\u00f1adieron 100 \u03bcL de conjugado de anti-inmunoglobulina humana polivalente (\u03b1, \u03b3 y \u03bc espec\u00edfica) marcada con fosfatasa alcalina: Cat. no.<\/p>\n
A3313 (Sigma-Aldrich, Inc.; EE.UU.), diluido 1:6,000 en PBS-T20. Las placas se incubaron durante 1 h a 37\u00b0C y nuevamente fueron lavadas.<\/p>\n
Despu\u00e9s de la incubaci\u00f3n y el lavado, se a\u00f1adieron 100 \u03bcL de 1 mg mL-1 de p-nitrofenil fosfato (Sigma-Aldrich, Inc.; EE.UU.) preparado en tamp\u00f3n de dietanolamina al 10 %, pH 9.7. Las placas se\u00a0 incubaron durante 25 min a temperatura ambiente. Finalmente, se detuvo la reacci\u00f3n con 50 \u03bcL de 3 M de NaOH. La densidad \u00f3ptica (DO) a 410 nm se midi\u00f3 en un lector de microplacas modelo MR550 (Bio-Rad Laboratories, Inc.; EE.UU.). Una muestra se consider\u00f3 positiva si la DO fue igual o superior a 0.37. Este punto de corte se estim\u00f3 con base en el an\u00e1lisis de la curva ROC. El punto de corte \u00f3ptimo se defini\u00f3 como el valor que maximiza el \u00e1rea bajo la curva ROC (Figura 1A).<\/p>\n
Todas las muestras se ensayaron tambi\u00e9n por BioELISA Chagas (Biokit; Espa\u00f1a), que utiliz\u00f3 como ant\u00edgeno p\u00e9ptidos sint\u00e9ticos TcD, TcE, PEP2 y\u00a0 TCLi1-2 y por Chagatest ELISA recombinante V.3.0 (Winer laboratorio;\u00a0 Argentina), que utiliz\u00f3 como ant\u00edgeno las prote\u00ednas recombinantes Ag1, Ag2, g13, Ag30, Ag36, y SAPA. Otras pruebas usadas fueron: Chagatest HAI (Winer Lab; Argentina.), que utiliz\u00f3 como ant\u00edgeno eritrocitos de oveja sensibilizados con lisado de par\u00e1sitos y la prueba de IC, que incluy\u00f3, como ant\u00edgeno, los ant\u00edgenos recombinantes H49 y 1F8 (Chagas AB rapid,\u00a0 Standard Diagnostics; Corea). Todas las determinaciones de los kits comerciales se realizaron siguiendo las instrucciones del fabricante.<\/p>\n
El ADN gen\u00f3mico se aisl\u00f3 mediante el m\u00e9todo de \u201csalting-out\u201d a partir de la capa de leucocitos tomados de los 4 mL de sangre anticoagulada con\u00a0 EDTA13. El ADN nuclear y del kinetoplasto de T. cruzi fueron amplificados mediante el m\u00e9todo de PCR con el termociclador PTC-200 \u00ae Thermal\u00a0 Cycler (Bio-Rad Laboratories, Inc.; EE.UU.). El l\u00edmite de detecci\u00f3n del ADN de T. cruzi para los protocolos de PCR optimizados se estim\u00f3 en 10\u00a0 par\u00e1sitos por 100 \u03bcg \u03bcL-1 de ADN total aislado. Esta concentraci\u00f3n se determin\u00f3 mediante la mezcla de muestras de sangre anticoagulada con\u00a0 EDTA de una persona sana (no infectada por T. cruzi) con 1 mL de epimastigotes de T. cruzi I. Las mezclas ensayadas fueron: 1,000, 100, 10, 1,\u00a0 0.1, 0.01 y 0.001 par\u00e1sitos en 4 mL de sangre total. El ADN gen\u00f3mico se aisl\u00f3 de la capa leucocitaria, como se mencion\u00f3 anteriormente y\u00a0 diferentes concentraciones de ADN se probaron en cada ensayo de PCR. Los experimentos se realizaron por triplicado en tres ocasiones\u00a0 independientes.<\/p>\n
La secuencia de ADN nuclear (ADNn) de T. cruzi repetida en \u201ct\u00e1ndem\u201d fue amplificada utilizando los cebadores Tcz1 (5\u2019-CGA GCT\u00a0 CTT GCC CAC ACG GGT GCT-3 \u2018) y Tcz2 (5\u2019-CCT CCA AGC AGC GGA TTC TAG AGG-3\u2018) que amplificaron un fragmento de 188 pb ~ durante 30\u00a0 ciclos (94\u00b0 C por 30 s, 55\u00b0 C por 30 s, 72\u00b0 C por 30 s). Cada PCR conten\u00eda 0.5 M de cada cebador, 2 mM de MgCl2, 200 mM de dNTPs, 1X tamp\u00f3n de Taq y 1 U de Taq ADN polimerasa (Invitrogen Brasil Ltda., Brasil).<\/p>\n
La regi\u00f3n variable del ADN del minic\u00edrculo del kinetoplasto (kDNA) fue amplificada por los cebadores 121 (5\u2019-AAA TAA TGT ACG GGK GAG ATG CAT GA-3 \u2018) y 122 (5\u2019-GGT TCG ATT GGG GTT GGT GTA ATA TA-3\u2018) que amplificaron un fragmento de 330 pb ~ durante 35 ciclos (94\u00b0 C por 1 min, 63.5\u00b0 C por 1 min, 72\u00b0 C por 1 min). Cada reacci\u00f3n conten\u00eda 0.5 M de cada cebador, 4.5 mM de MgCl2, 200 mM de dNTPs, 1X tamp\u00f3n de Taq y 1.25 U de Taq ADN polimerasa (Invitrogen Brasil Ltda., Brasil).<\/p>\n
Las\u00a0 condiciones de amplificaci\u00f3n de las PCR se llevaron a cabo con 800 ng de ADN molde en un volumen total de 20 \u03bcL. Los productos de la PCR se analizaron por electroforesis en gel de agarosa al 2 % te\u00f1ido con bromuro de etidio en tamp\u00f3n TAE 1X. Cada amplic\u00f3n fue reconocido de acuerdo\u00a0 con su tama\u00f1o, comparado con el marcador de peso molecular XIV (Roche Applied Science; EE.UU.). Todas las etapas de extracci\u00f3n de ADN y las\u00a0 mezclas de reacci\u00f3n usadas para los ensayos de PCR se controlaron y se compararon con controles positivos y negativos; los controles positivos\u00a0 incluyeron ADN aislado de la cepa de T. cruzi Silvio X-10 y el ADN aislado de la sangre infectada con dos cepas de T. cruzi I (MHOM\/CO\/07\/REM y\u00a0 MHOM\/CO\/07\/338); mientras que los controles negativos incluyeron ADN aislado de T. rangeli, Leishmania panamensis, Toxoplasma gondii, Crithidia lucillae y ADN aislado de la sangre no infectada con T. cruzi.<\/p>\n
En la fase cr\u00f3nica de la EC el diagn\u00f3stico se basa en la presencia de anticuerpos contra T. cruzi debido a la ausencia o baja parasitemia; por lo tanto, com\u00fanmente se utilizan pruebas serol\u00f3gicas como ELISA, IFI y HAI. Con el fin de resolver los inconvenientes de resultados falsos negativos y\u00a0 falsos positivos con las pruebas serol\u00f3gicas convencionales, se han desarrollado ensayos serol\u00f3gicos no convencionales con prote\u00ednas\u00a0 recombinantes de T. cruzi, las cuales tienen valores de sensibilidad y especificidad cercanos al 100% 7-9,16. A pesar de estos avances, y dado que\u00a0 actualmente no hay disponible ninguna prueba de referencia, la OPS recomienda el uso de dos pruebas basadas en diferentes principios para detectar ant\u00edgenos6. Sin embargo, esta recomendaci\u00f3n ha incrementado los resultados discordantes y las dificultades en el diagn\u00f3stico. Adem\u00e1s, existen numerosas pruebas disponibles en el mercado, pero con una significativa heterogeneidad relacionada con su exactitud, lo cual dificulta la selecci\u00f3n de la m\u00e1s adecuada para garantizar el diagn\u00f3stico en zonas end\u00e9micas.<\/p>\n
La evidencia experimental de este estudio muestra que BioELISA\u00a0 Chagas y Chagatest ELISA recombinante V 3.0 presentaron los valores m\u00e1s altos de sensibilidad y especificidad, as\u00ed como VPP y VPN.\u00a0 Adem\u00e1s, tienen una buena capacidad discriminatoria y alta calidad de la sensibilidad y la especificidad; adem\u00e1s de la capacidad para confirmar y\u00a0 excluir el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi en pacientes en fase cr\u00f3nica de la EC. Sin embargo, a pesar de que el nivel de correlaci\u00f3n es alto los resultados obtenidos mediante el uso de BioELISA Chagas fueron mejores que con Chagatest ELISA\u00a0 recombinante v. 3.0, como ha sido reportado en estudios previos en Colombia en los que este \u00faltimo mostr\u00f3 95% de sensibilidad17. Esto podr\u00eda ser explicado por diferencias en la composici\u00f3n y mezcla de p\u00e9ptidos sint\u00e9ticos o prote\u00ednas recombinantes de T. cruzi . As\u00ed, el\u00a0 BioELISA Chagas incluye los p\u00e9ptidos sint\u00e9ticos TcD, TcE, PEP2 y TCLi1-2 (www.biokit.com), con el modelo de ep\u00edtopes antig\u00e9nicos inmunodominantes de T. cruzi 18; mientras que, Chagatest ELISA recombinante v.3.0 incluye las prote\u00ednas recombinantes Ag1, Ag2, Ag13, Ag30, Ag36, y SAPA (www.wiener-lab.com.ar). Las caracter\u00edsticas de sensibilidad y especificidad de cada p\u00e9ptido\/prote\u00edna y sus mezclas fueron revisados previamente por Jose Franco da Silveira9. Sin embargo, es importante se\u00f1alar que ambas pruebas muestran altos niveles de correlaci\u00f3n entre s\u00ed; por otra parte, exhiben ant\u00edgenos reconocidos principalmente por anticuerpos de la clase de IgM, tales como TCLi1-2 y SAPA. Sin embargo, en la\u00a0 reacci\u00f3n ant\u00edgeno – anticuerpo en la prueba BioELISA Chagas se identifican anticuerpos de la clase de IgG e IgM humana, mientras que el\u00a0 Chagatest ELISA recombinante v.3.0 s\u00f3lo identifica IgG humana. Por el contrario, el ensayo inmunocromatogr\u00e1fico de Chagas AB rapid es una prueba diagn\u00f3stica r\u00e1pida que utiliza los ant\u00edgenos recombinantes H49 y 1F8 que han demostrado valores de sensibilidad y especificidad de 97-100% 16,19. Esta evidencia puede explicar los buenos resultados obtenidos en sensibilidad, especificidad, VPP, VPN, calidad de la sensibilidad, calidad de la especificidad y la capacidad discriminatoria. Adem\u00e1s, su simplicidad y facilidad de interpretaci\u00f3n hacen que sea muy \u00fatil en el diagn\u00f3stico r\u00e1pido de infecci\u00f3n por T. cruzi en estudios de campo. Sin embargo, para los sujetos con resultados negativos ser\u00eda necesario el uso de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n por T. cruzi. Por otro lado, el ELISA casero y la HAI exhiben altos valores de sensibilidad, especificidad, VPP y VPN.<\/p>\n
Sin embargo, el ELISA casero tiene mejores valores de sensibilidad y VPN que el Chagatest HAI, mientras Chagatest HAI tiene mejores valores de\u00a0 especificidad y VPP que el ELISA casero (Tabla 1); adem\u00e1s, el ELISA casero present\u00f3 mayor capacidad discriminatoria y capacidad para confirmar\u00a0 y descartar el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi. Estas pruebas mostraron falsos positivos y negativos, lo cual podr\u00eda ser resuelto o mejorarse con el uso de las preparaciones antig\u00e9nicas de tripomastigotes y\/o amastigotes de cepas aut\u00f3ctonas de T. cruzi.<\/p>\n
La detecci\u00f3n de T. cruzi en muestras de sangre humana mediante amplificaci\u00f3n de ADN con m\u00e9todos basados en PCR ha sido aplicado para\u00a0 diagnosticar EC en pacientes, quienes han progresado a la fase cr\u00f3nica.<\/p>\n
Pero, dado que durante esta fase el n\u00famero de par\u00e1sitos que circula en sangre perif\u00e9rica es bajo o intermitente, los m\u00e9todos basados en la PCR tienen sensibilidades del orden de 45-65 %, mientras que la especificidad se mantiene cerca del 100 % 5, 20,21. Aunque las secuencias diana utilizadas en este estudio tienen un alto n\u00famero de copias en el genoma de T. cruzi (5,000 a 10,000 copias de ADNk y ~ 10% de ADNn por par\u00e1sito) 22,23, los resultados mostraron moderados a bajos valores de sensibilidad y calidad de sensibilidad para ensayos de PCR realizadas con los cebadores 121\/122 y Tcz1\/Tcz2. Estos resultados se podr\u00edan explicar, al menos en parte, por la disponibilidad de ADN molde en la mezcla de reacci\u00f3n, que podr\u00eda estar relacionada con el tipo de cepa de T. cruzi. As\u00ed, se observan diferencias en el n\u00famero de copias de ADN sat\u00e9lite blanco, entre las cepas de T. cruzi que son m\u00e1s abundantes en T. cruzi II que en T. cruzi I 24, as\u00ed como hay diferencias en el nivel de parasitemia, que es mayor en infecci\u00f3n por T. cruzi I comparada con T. cruzi II 20. Estos resultados son relevantes porque en Colombia T. cruzi I es el grupo predominante, tanto en el ciclo dom\u00e9stico como selv\u00e1tico, pero hay evidencia de\u00a0 infecci\u00f3n por T. cruzi II en pacientes con cardiopat\u00eda chag\u00e1sica 25. Estos resultados muestran que pacientes con un resultado positivo de PCR pueden ser diagnosticados como infectados por T. cruzi, pero para los pacientes con un resultado PCR negativo ser\u00e1 necesario el uso de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n por T. cruzi. Esto indica que las pruebas moleculares pueden confirmar el diagn\u00f3stico,\u00a0 pero no excluirlo (Figura 1C). De hecho, estas pruebas moleculares mostraron de moderada a baja correlaci\u00f3n con las dem\u00e1s pruebas.<\/p>\n
En conclusi\u00f3n, nuestra evidencia experimental sugiere que la estrategia de diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi en pacientes que han progresado a la fase cr\u00f3nica de EC se puede hacer mediante el uso de BioELISA Chagas o Chagatest ELISA recombinante v.3.0, que no s\u00f3lo mostraron un\u00a0 mejor rendimiento diagn\u00f3stico, sino que tambi\u00e9n pueden confirmar y excluir el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi. Por otra parte, Chagas AB Rapid podr\u00eda ser utilizado en los casos en que sea necesario un diagn\u00f3stico r\u00e1pido. Por \u00faltimo, los ensayos moleculares se pueden usar para\u00a0 confirmar el diagn\u00f3stico; sin embargo, debido a la baja sensibilidad, especificidad y capacidad discriminatoria es importante la utilizaci\u00f3n de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n por T. cruzi.<\/p>\n