En la edición de la revista ALAC de diciembre 2020, se publicó el trabajo “Optimización de un método de Cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masa para la determinación de ácidos grasos poliinsaturados en plasma.“
Los ácidos grasos omega-3 generan mediadores lipídicos bioactivos importantes para la resolución de la inflamación, mientras que los ácidos grasos omega-6 promueven inflamación y trombosis.
La relación de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) ω3 y ω6 en sangre ha sido objeto de estudio en los últimos años y ha sido demostrado que una alta relación ω6/ω3 promueve la patogénesis de la enfermedad cardiovascular, cáncer, enfermedades autoinmunes, asimismo contribuye a la aterosclerosis, obesidad diabetes y trombosis.
La cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masa es una técnica analítica ampliamente utilizada para ensayos clínicos por su gran especificidad y sensibilidad así como también por los bajos tiempos de ensayo.
El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo, puesta a punto y optimización de un método para dosar ácido araquidónico (AA, ω6-C20:4), di-h-γ-linoleico (DGLA, ω6-C20:30), docosahexaenoico (DHA, ω3-CC22:6) y eicosapentaenoico (EPA, ω3-C20:5) en muestras de plasma con EDTA-4K obtenidas con el sistema vaccutainer BD. Se utilizó un estándar combinado de DHA, EPA, DGLA y AA con concentración (100±3) µg/ml.
El método se validó realizando fortificados de matriz para obtener concentraciones agregadas en el rango 0-80 µg/ml. Se utilizó un método cromatográfico isocrático con metanol de fase móvil, y el espectrómetro de masa en modo doble para detectar las transiciones de los 4 ácidos grasos.
Las calibraciones obtenidas fueron lineales para todos los analitos en el rango estudiado con tiempo de retención de 4.5, 4.8, 4.6 y 4.3 min para AA, DGLA, EPA y DHA respectivamente. El tiempo total de corrida fue de 7 min. Los límites de cuantificación se establecieron en 1.0, 1.5, 0.3 y 0.3 µg/ml para AA, DGLA, EPA y DHA respectivamente; mientras que los límites de detección fueron de 0.3, 0.5, 0.1 y 0.1 ug/ml para AA, DGLA, EPA y DHA respectivamente.
El ensayo de repetibilidad presentó variaciones menores al 3%. El método propuesto permitió separar y cuantificar los ácidos grasos seleccionados en plasma de forma rápida, sensible y simultánea, con muy buena precisión, límite de detección y cuantificación.
La baja variabilidad intra- e inter- individuo observada en muestras de plasma y glóbulo rojo, permite utilizar el dosaje de la relación omega-6/omega-3 como biomarcardor de inflamación, aportando información precisa y confiable al estudio de los pacientes.
Autores: Espinosa, JP(1); Goria, NM(2); Pijuan, MC(2); Gentili, P(2); Fares Taie, S(2)
- Fares Taie Biotecnología, Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
- Fares Taie Instituto de Análisis, Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
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